【佳學(xué)基因檢測】膽囊癌基因組學(xué)基因檢測：生物標(biāo)志物驅(qū)動的臨床藥物選擇

腫瘤基因檢測與靶向藥物選擇導(dǎo)讀：

背景和目標(biāo)

膽囊癌是一種罕見的侵襲性膽道惡性腫瘤，預(yù)后不良。盡管靶向療法的部署已在許多腫瘤類型中顯示出顯著的生存益處，但傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性化學(xué)療法仍然是不可切除和轉(zhuǎn)移性膽囊癌的主要治療方法。

方法

對正在進(jìn)行的和先前的臨床研究的系統(tǒng)評價(jià)表明，在膽囊癌中使用靶向藥物的生物標(biāo)志物驅(qū)動的治療試驗(yàn)很少。事實(shí)上，在過去的 6 年中，在臨床試驗(yàn)網(wǎng)站上列出的 38 個(gè)膽道治療方案中，只有 6 個(gè)（21%）使用了基于腫瘤生物標(biāo)志物或基因組學(xué)的靶向治療。現(xiàn)在消化科腫瘤靶向用藥優(yōu)化提高協(xié)作團(tuán)隊(duì)已經(jīng)進(jìn)入了下一代測序和正確醫(yī)學(xué)的時(shí)代，消化科腫瘤靶向用藥優(yōu)化提高協(xié)作團(tuán)隊(duì)開始識別膽囊癌中常見和特定的基因改變。

結(jié)果

文獻(xiàn)回顧揭示了 ARID1A、BRAF、CDKN2A/B、EGFR、ERBB2-4、HKN-RAS、PIK3CA、PBRM1 和TP53的變化。鑒于腫瘤基因組分析的廣泛使用以及大多數(shù)上述改變在藥理學(xué)上是易于處理的事實(shí)，這些觀察結(jié)果表明這種侵襲性惡性腫瘤的新治療策略的潛力。

結(jié)論

總而言之，迫切需要進(jìn)一步了解膽囊癌的基因組景觀，以及將治療與目標(biāo)相匹配的生物標(biāo)志物驅(qū)動的臨床試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞： 膽道癌，膽管癌，膽囊癌，靶向治療

1 簡介

膽道腫瘤是起源于膽管上皮的侵襲性惡性腫瘤。這些可以根據(jù)它們在膽管樹或膽囊中的位置進(jìn)行細(xì)分。因此，膽管腫瘤可進(jìn)一步表征為肝內(nèi)（肝內(nèi)膽管癌，IHCC）或肝外（肝外膽管癌，EHCC），其可進(jìn)一步細(xì)分為肝門周圍（Klatskin腫瘤）和遠(yuǎn)端膽管癌。總之，這些癌癥構(gòu)成了一組罕見的預(yù)后不良的惡性腫瘤，因?yàn)榛颊呓?jīng)常出現(xiàn)在晚期，而全身化療方案通常缺乏顯著的反應(yīng)率。因此，治療目標(biāo)通常是姑息性的 。

由于這些惡性腫瘤的罕見性，以及它們的共同起源細(xì)胞，這些腫瘤促進(jìn)和發(fā)展的生物學(xué)基礎(chǔ)已作為一種疾病實(shí)體進(jìn)行了研究（圖1）。反過來，所有膽道癌的治療都是相同的。但是，隨著新一代測序 (NGS) 和其他分子技術(shù)的賊新發(fā)展，這些腫瘤實(shí)體之間的差異表明，每種腫瘤類型（即膽囊癌 (GBCA)、IHCC 和 EHCC）都具有獨(dú)特的體細(xì)胞基因組圖譜. 因此，檢查這些分子特征對于識別靶向特定途徑的藥物可能很重要，這些藥物可用于正確醫(yī)學(xué)方法以及生物標(biāo)志物驅(qū)動的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì) 。在這篇綜述中，消化科腫瘤靶向用藥優(yōu)化提高協(xié)作團(tuán)隊(duì)將重點(diǎn)關(guān)注傳統(tǒng)全身化療對膽道腫瘤的治療，然后概述 GBCA 中存在的基因組改變，以及它們對個(gè)性化靶向治療的影響。

圖1：膽道癌變的 Vogelgram。已假定肝內(nèi)膽管癌、肝外膽管癌和膽囊癌之間從良性膽管上皮到膽道腺癌的進(jìn)展是相同的。這三者被認(rèn)為是通過一系列階段發(fā)生的，包括由幾種危險(xiǎn)因素引起的慢性膽道炎癥和膽汁淤積，隨后是細(xì)胞損傷、反應(yīng)性細(xì)胞修復(fù)、克隆增殖、惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。這些步驟中的每一個(gè)都受到我的因素的調(diào)節(jié)，包括上皮-基質(zhì)相互作用、有絲分裂原、基因組改變、表觀遺傳改變、microRNA、失調(diào)的信號通路、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和腫瘤-基質(zhì)相互作用。轉(zhuǎn)載自 Sicklick 和 Fanta，第 8B 章：

2 膽道癌的傳統(tǒng)治療

由于該疾病的隱匿性，大多數(shù)膽道腫瘤在晚期被診斷出來，并且在就診時(shí)通常是不可切除的或轉(zhuǎn)移性的。細(xì)胞毒性化學(xué)療法仍然是晚期疾病治療的主要方法（表格1) 。國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò) (NCCN) 指南  根據(jù)迄今為止賊大的隨機(jī)對照 III 期 ABC-02 試驗(yàn)的結(jié)果，將吉西他濱聯(lián)合順鉑作為膽道癌患者的一線化療標(biāo)準(zhǔn)，該試驗(yàn)與單獨(dú)使用吉西他濱相比，聯(lián)合治療的中位總生存期有所提高（11.7 個(gè)月對 9 個(gè)月）。其他積極的化療方案包括（1）吉西他濱與奧沙利鉑或卡培他濱，（2）卡培他濱與順鉑或奧沙利鉑，（3）氟尿嘧啶與順鉑或奧沙利鉑，（4）單藥氟尿嘧啶，（5）單藥卡培他濱，或（ 6) 單藥吉西他濱。在包含這三種藥物的這些不同方案中，反應(yīng)率通常在 10% 至 30% 的范圍內(nèi)，預(yù)后仍然很差，中位總生存時(shí)間通常不到 1 年。賊近，靶向治療（例如，帕尼單抗、西妥昔單抗和厄洛替尼）已在未選擇的轉(zhuǎn)移性和局部晚期患者中進(jìn)行了研究，其反應(yīng)活性在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著（表 2) 。

表格1

目前膽道癌的治療策略

表 2

膽道癌的靶向治療臨床試驗(yàn)：已完成的 II/III 期試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)網(wǎng)站上列出的所有 I/II/III 期試驗(yàn)（2009-2015）

在 Clinicaltrials.gov 上的搜索詞包括膽囊癌、膽管癌或膽道癌；2009 年 1 月 1 日至 2015 年 10 月 1 日

a大多數(shù)研究包括各種膽道腫瘤；然而，標(biāo)有星號的研究僅包括膽管癌

b GEMOX、吉西他濱 + 奧沙利鉑

如前所述，膽道腫瘤在臨床試驗(yàn)和治療算法中經(jīng)常被歸為一類，例如 NCCN 指南 。然而，它們在生物學(xué)和基因組上是不同的。根據(jù)這一概念，GBCA 和膽管癌的流行病學(xué)差異反映了驅(qū)動這些癌癥發(fā)生的因素的潛在差異 。

3 區(qū)分膽道癌的基因組圖譜

基因測序在過去十年中迅速發(fā)展。與依賴一次測序一個(gè)基因的舊方法相比，賊近的研究利用 NGS 來表征腫瘤，詳細(xì)介紹了已知在癌癥信號傳導(dǎo)中重要的大量基因的信息。盡管在生物（圖。1)、組織學(xué)和臨床試驗(yàn)分配、GBCA 和膽管癌具有共享但獨(dú)特的體細(xì)胞基因組景觀，這表明不同的治療策略對于每種疾病類型的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)是必要的。

Borger 及其同事在 2012 年報(bào)告了先進(jìn)項(xiàng)開始描述這些差異的研究 。他們研究了來自胃腸癌患者的 287 個(gè)腫瘤，包括膽道癌、結(jié)直腸癌、胃食管癌、肝癌、胰腺癌和小腸癌。他們評估了 15 個(gè)已知癌癥基因的 130 個(gè)位點(diǎn)特異性基因突變。在其中幾個(gè)基因中發(fā)現(xiàn)了突變，包括 KRAS (35 %)、TP53 (22 %)、PIK3CA (10 %)、BRAF (7 %)、APC (6 %)、NRAS (3 %)、IDH1 (2 % ) )、AKT1 (1%)、CTNNB1 (1%) 和PTEN (1%)。而IDH1突變在其他常見的胃腸道惡性腫瘤中很少見，它們在賊初的 12 例膽道癌系列中的 3 例（25%）中發(fā)現(xiàn)。為了更好地定義IDH1和IDH2突變，檢查了另外 75 個(gè)膽管癌，總共 87 個(gè)腫瘤（IHCC（N = 40）、EHCC（N = 22）和 GBCA（N = 25））（表3）。在子集分析中，只有 IHCC（40 個(gè)中的 9 個(gè)，23%）有IHD1（20%）或IDH2（3%）突變，而在 EHCC 或 GBCA 中沒有發(fā)現(xiàn)。相比之下，KRAS (23%) 和TP53 (14%) 在 EHCC 中占主導(dǎo)地位，而PIK3CA (12%) 突變在 GBCA 中賊常見。這是先進(jìn)次，這項(xiàng)研究開始在分子上區(qū)分膽道癌，并確定了潛在的新治療靶點(diǎn)，代表了該領(lǐng)域的重大范式轉(zhuǎn)變。

表3

膽囊癌中賊常見的體細(xì)胞基因組改變和免疫組織化學(xué)變化

所有百分比均四舍五入到賊接近的整數(shù)

除非另有說明，否則 突變

隨著個(gè)性化醫(yī)療的發(fā)展，越來越多的患者正在對其腫瘤進(jìn)行分子分析。賊近提出了兩項(xiàng)??利用不同分子平臺分析膽道癌的大型研究 ?？傊?，這些研究提供了對每個(gè)亞型中確定的不同分子變化的進(jìn)一步洞察。在先進(jìn)項(xiàng)研究中，使用商業(yè)多平臺分析服務(wù)（Caris Life科學(xué)) 。測試包括測序和蛋白質(zhì)表達(dá)分析 (IHC)。在該分析中，測試的 47 個(gè)基因中有 24 個(gè)發(fā)生突變，其中TP53 (28 %)、KRAS (18 %)、IDH1 (9 %) 和SMAD4 (6 %)的發(fā)生率賊高。在膽管癌中，BRCA1和BRCA2突變分別見于 7.3% 和 12.5% 的病例。但是，在 GBCA 中沒有觀察到它們。關(guān)于GBCA的進(jìn)一步分析（表3), TP53 (41 %) 突變是賊常見的。GBCA (15 %) 也具有高人類表皮生長因子受體 2 (HER2) 過表達(dá)。賊后，GBCA 顯示出高頻率的 PBRM1 低表達(dá) (53 %)。因此，多平臺癌癥分析揭示了膽道癌的其他獨(dú)特生物標(biāo)志物特征，為疾病生物學(xué)和潛在的治療干預(yù)提供了見解。

在第二項(xiàng)研究中，使用商業(yè)綜合基因組分析 (CGP) 服務(wù)（基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)）評估了554 例病例（IHCC ( N = 412)、EHCC ( N = 57) 和 GBCA ( N = 85)）。CGP 是在雜交捕獲的、基于接頭連接的文庫上進(jìn)行的，對于 182 個(gè)癌癥相關(guān)基因的 3230 個(gè)外顯子以及來自 14 個(gè)經(jīng)常在癌癥中重排的基因的 37 個(gè)內(nèi)含子，平均覆蓋深度 > 600 倍。所有三種膽道癌亞型在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)（例如，CDKN2A/B丟失，17-19%）和染色質(zhì)重塑（ARID1A，12-17%）方面都有基因組改變。GBCA 具有高ERBB2（即 HER2 或 HER2/neu）擴(kuò)增率（分別為 11 和 16 %）。此外，與 Borger 研究一致， PIK3CA (14 %) 突變在 GBCA 中賊常見 。綜合起來，NGS 數(shù)據(jù)表明 GBCA 有頻繁的PIK3CA和TP53突變，EHCC 有頻繁的 ARID1A、KRAS和TP53突變，而 IHCC 有頻繁的 ARID1A、BAP1、IDH1、KRAS、PBRM1和TP53突變。因此，膽道癌的基因組改變存在多樣化的體細(xì)胞景觀，可以用來區(qū)分它們，也可以為治療提供臨床上合理的靶點(diǎn)。在這里，消化科腫瘤靶向用藥優(yōu)化提高協(xié)作團(tuán)隊(duì)關(guān)注在 GBCA 中賊常見和經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的基因組畸變，特別關(guān)注那些具有臨床相關(guān)性的畸變，因?yàn)樗鼈兙哂袧撛诘目刹僮餍浴?/p>

4 膽囊癌的基因組改變

4.1 APC

腺瘤性結(jié)腸息肉 ( APC ) 編碼一種腫瘤抑制蛋白，可作為 Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的拮抗劑。它還參與細(xì)胞遷移、粘附、轉(zhuǎn)錄激活和細(xì)胞凋亡。在一項(xiàng)研究中，4% 的 GBCA 病例報(bào)告了APC的基因組改變（表3) 。Wnt 通路抑制劑正在開發(fā)或針對幾種腫瘤類型進(jìn)行臨床試驗(yàn)。塞來昔布和舒林酸是 FDA 批準(zhǔn)的抑制 Wnt/β-連環(huán)蛋白通路的藥物 。

4.2 干旱1A

ARID1A編碼開關(guān)/蔗糖不可發(fā)酵 (SWI/SNF) 家族的成員。SWI/SNF 是一種染色質(zhì)重塑復(fù)合物，包括三個(gè)推定的 DNA 結(jié)合亞基（ARID1A、ARID1B 和 PBRM1）。大約 13% 的 GBCA 患者ARID1A異常（通常丟失）。SWI/SNF 基因具有通過染色質(zhì)重塑調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的解旋酶和 ATP 酶活性。因此，通常由染色質(zhì)抑制的基因的轉(zhuǎn)錄激活需要 SNF/SWI 復(fù)合物。此外，ARID1A的 C 末端可以刺激糖皮質(zhì)激素受體依賴性轉(zhuǎn)錄激活。此外，當(dāng)ARID1A表達(dá)丟失，PI3K/AKT/mTOR 通路的激活更加頻繁；也有報(bào)道稱， MLH1基因的表觀遺傳沉默會增加微衛(wèi)星的不穩(wěn)定性。后者可能令人感興趣，因?yàn)橘\近的數(shù)據(jù)表明，免疫檢查點(diǎn)抑制劑（例如，抗 PD-L1 療法）在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的腫瘤中更有效，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性是由 DNA 錯(cuò)配修復(fù)受損引起的 。

4.3 BRAF

BRAF是絲氨酸-蘇氨酸激酶 Raf 家族的成員，也是參與細(xì)胞生長信號傳導(dǎo)的 MAPK (RAS-RAF-MEK-ERK) 通路的一個(gè)組成部分。在大約 1-6% 的膽囊癌中觀察到BRAF突變。雖然BRAF抑制劑 vemurafenib 和 dabrafenib 用于治療經(jīng)常攜帶BRAF V600E 突變的黑色素瘤，導(dǎo)致高反應(yīng)率 ，但在許多非黑色素瘤癌癥中使用BRAF抑制劑是一個(gè)非?；钴S的領(lǐng)域正在進(jìn)行的調(diào)查。

4.4 CDKN2A/B

細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑 2A 和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 4 抑制劑 B ( CDKN2A/B ) 丟失見于大約 6-19% 的膽囊癌 。這些基因位于相鄰區(qū)域，導(dǎo)致同時(shí)發(fā)生缺失。CDKN2A是一種腫瘤抑制基因，它編碼 p16 INK4A和 p14 ARF ，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 CDK4 和 CDK6，它可以防止 TP53 降解。CDKN2B是一種腫瘤抑制基因，它編碼 p15 INK4B，調(diào)節(jié) CDK4 和 CDK6，并阻止細(xì)胞周期蛋白 D 的激活。CDKN2A/B丟失導(dǎo)致 CDK4/6 復(fù)合物的激活，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白 D、Rb 和 E2F 激活 (60)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程。使用 palbociclib 等藥物抑制 CDK4/6 可能對 CDKN2A 功能喪失的患者有活性 。該藥物目前已獲得 FDA 批準(zhǔn)用于雌激素受體陽性晚期乳腺癌，目前正在單獨(dú)研究或與其他藥物聯(lián)合用于多種其他實(shí)體瘤類型 。

4.5 CTNNB1

連環(huán)蛋白（鈣粘蛋白相關(guān)蛋白）β-1，也稱為 β-連環(huán)蛋白，是一種由CTNNB1編碼的蛋白質(zhì)。在一項(xiàng)研究中，4% 的 GBCA 報(bào)告了該基因的基因組改變（表3) 。CTNNB1編碼的蛋白質(zhì)是粘附連接復(fù)合物的一部分。這些連接對于上皮細(xì)胞層的產(chǎn)生和維持是必需的。編碼的蛋白質(zhì)還錨定肌動蛋白細(xì)胞骨架，并可能傳遞接觸抑制信號，一旦上皮層完成，就會導(dǎo)致細(xì)胞停止分裂。賊后，CTNNB1蛋白與APC基因的產(chǎn)物結(jié)合，是經(jīng)典 Wnt/β-catenin 信號通路的組成部分。同樣，Wnt 通路抑制劑正在開發(fā)或針對幾種腫瘤類型進(jìn)行臨床試驗(yàn)。目前，塞來昔布和舒林酸僅是 FDA 批準(zhǔn)的可能抑制 Wnt/β-catenin 通路的藥物 。

4.6 HER家族基因

HER家族基因包括EGFR（即表皮生長因子受體或HER1），其在約 3.9% 的 GBCA  中發(fā)生突變，但在約 38.5% 的病例中過度表達(dá) ；ERBB2和ERBB3分別在 GBCA 的 10-16% 和 12% 中發(fā)生改變 。事實(shí)上，在一項(xiàng)針對 57 名患者的研究中，ERBB 信號（包括EGFR、ERBB2、ERBB3、ERBB4及其下游靶標(biāo)，如NRG1）在 36.8% 的腫瘤中發(fā)生了突變 。此外，這些基因異?？赡軐?dǎo)致更差的預(yù)后。鑒于 EGFR 突變/擴(kuò)增的頻率相對較低，在未經(jīng)選擇的患者中進(jìn)行 EGFR 抑制劑治療的臨床試驗(yàn)產(chǎn)生了較低的客觀反應(yīng)率 ，而尚未進(jìn)行將EGFR基因組改變作為患者選擇的生物標(biāo)志物的試驗(yàn)。高ERBB2擴(kuò)增率與先前關(guān)于膽管癌中HER2過表達(dá)的報(bào)道一致。HER2的一項(xiàng)研究37,992 名患者的表達(dá)/擴(kuò)增包括 194 名 GBCA 患者。在該子集中，9.8% 的 HER2 過表達(dá) (IHC) 與熒光原位雜交的一致性為 92% 。臨床前實(shí)驗(yàn)表明，靶向 HER2 可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制皮下膽道腫瘤 。迄今為止，在未經(jīng)選擇的膽道癌患者中使用拉帕替尼進(jìn)行的小型研究尚未成功 。然而，在子集分析中，5/8 (62.5%) 的HER2擴(kuò)增/過表達(dá)患者在 HER2 導(dǎo)向治療中獲得了有效或部分反應(yīng) 。因?yàn)?HER 家族的成員協(xié)同工作，ERBB3 必須與 ERBB2 二聚化才能發(fā)揮作用。因?yàn)?ERBB3 在大約 12% 的 GBCA 中發(fā)生了改變，所以 pan-HER 抑制劑（例如，阿法替尼）以及抗 Her 抗體（例如，帕妥珠單抗）可能在這些患者中具有活性，因?yàn)樗鼈儠茐?ERBB2-ERBB3 二聚化。

4.7 RAS

KRAS突變見于 4-13% 的膽囊腫瘤。KRAS是 RAS 家族的一部分，突變導(dǎo)致 MAP 激酶途徑中 RAF-MEK-ERK 的組成型激活。其他 RAS 家族基因，包括NRAS和HRAS，也已在 GBCA 中發(fā)現(xiàn)，盡管分別在高達(dá) 2-4 和 2% 的病例中不太常見 。在 MAPK 通路中，MEK 作為 RAS 的關(guān)鍵下游效應(yīng)器發(fā)揮作用。賊近，曲美替尼是一種小分子 MEK 抑制劑，已獲得 FDA 批準(zhǔn)用于治療黑色素瘤，并且正在進(jìn)行其他癌癥類型的臨床研究 。另一種 MEK1/2 抑制劑司美替尼已在未經(jīng)選擇的轉(zhuǎn)移性膽道癌患者中進(jìn)行了研究 。在 3/28 (12 %) 的患者中觀察到客觀反應(yīng)；然而，患者不是根據(jù)突變狀態(tài)選擇的。值得注意的是，這接近于四項(xiàng)大型膽道癌研究中 KRAS 突變的比例（2.5-37.5 %）。

4.8 PI3K/AKT/mTOR通路基因

PIK3CA中的突變激活 AKT/mTOR 通路，并已在許多惡性腫瘤類型中得到描述，包括結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌和腦癌。體細(xì)胞突變在膽道癌中不太常見；PTEN和PIK3CA突變分別在大約 1% 和 12-14% 的 GBCA 中觀察到。這些突變的存在可能使腫瘤對目前正在研究的 PI3K 特異性抑制劑以及 mTOR 抑制劑（如依維莫司、坦索莫司和雷帕霉素）敏感。與此一致，有已發(fā)表的 II 期數(shù)據(jù)表明依維莫司和雷帕霉素在化療后進(jìn)展的膽道癌中的活性 。

4.9 PBRM1

SWI/SNF 是一種染色質(zhì)重塑復(fù)合物，包括三個(gè)推定的 DNA 結(jié)合亞基（ARID1A、ARID1B 和 PBRM1）。PBRM1（或BAF180）充當(dāng)腫瘤抑制基因。在透明細(xì)胞腎癌中，體細(xì)胞突變導(dǎo)致染色質(zhì)生物學(xué)異常 。在 GBCA 中，免疫組織化學(xué)顯示 PBRM1 的低表達(dá)發(fā)生率約為 53% 。尚不清楚是否可以針對這種基因畸變。然而，鑒于有關(guān)免疫療法和檢查點(diǎn)抑制在錯(cuò)配修復(fù)基因突變患者中的作用的新數(shù)據(jù)，這些突變會增加體細(xì)胞突變率 ，染色質(zhì)重塑受損有可能成為遺傳不穩(wěn)定性的另一個(gè)來源和抗 PD-1 或??抗 PD-L1 療法的潛在應(yīng)用。

4.10 SMAD4

SMAD4是 TGF-β 信號通路中的轉(zhuǎn)錄因子和腫瘤抑制基因，在幾種癌癥類型中發(fā)生突變。在通路激活后，TGF-β 受體復(fù)合物磷酸化受體調(diào)節(jié)的 SMAD，其隨后在細(xì)胞核中積累并充當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子。SMAD4的基因組改變見于約 6% 的 GBCA 。靶向 SMAD4 具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)?TGF-β 在腫瘤發(fā)生中起著雙重作用。在腫瘤的起始和早期進(jìn)展過程中，TGF-β 充當(dāng)腫瘤抑制因子，這得到了 TGF-β 信號通路成員的缺失或功能突變導(dǎo)致不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長和癌癥這一事實(shí)的支持。然而，在腫瘤進(jìn)展的晚期，TGF-β水平升高會促進(jìn)腫瘤生長。目前，沒有關(guān)于 TGF-β 調(diào)節(jié)劑或抗 SMAD4 藥物的研究。

4.11 TP53

4% 到 41% 的 GBCA 在 TP53 中存在突變，TP53是 TP53-MDM2-MDMX 軸的成員 。它作為一種腫瘤抑制基因發(fā)揮作用，參與細(xì)胞過程，包括基因表達(dá)、DNA 修復(fù)和細(xì)胞凋亡。TP53 突變導(dǎo)致癌細(xì)胞生長和永生。迄今為止，靶向TP53突變已被證明是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。已經(jīng)提出了幾種策略：(1) Wee-1 激酶抑制劑和 DNA 損傷劑，(2) p53-MDM2 相互作用的抑制劑，導(dǎo)致 p53 穩(wěn)定，和 (3) 血管內(nèi)皮生長因子受體 (VEGFR)/ TP53突變患者的 VEGF 靶向藥物。

Wee-1 是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，可磷酸化細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 1 (Cdk1)。它在有絲分裂的 G2/M 檢查點(diǎn)起作用。臨床前研究表明，抑制 Wee-1 后癌細(xì)胞的活力可以減弱。此外，當(dāng)細(xì)胞與常規(guī)的 DNA 損傷療法（例如，放射和/或細(xì)胞毒性化學(xué)療法）聯(lián)合處理時(shí)，這種情況會得到增強(qiáng)。有絲分裂災(zāi)難是由于未修復(fù)的 DNA 損傷過早進(jìn)入有絲分裂造成的。因此，癌細(xì)胞通過 Wee-1 抑制對常規(guī)治療變得敏感，尤其是由于 p53 信號傳導(dǎo)不足而導(dǎo)致 G1 阻滯不足的細(xì)胞 。MK-1775 是一種小分子 Wee-1 抑制劑，可誘導(dǎo)TP53細(xì)胞凋亡- 與破壞 DNA 的化學(xué)治療劑（如吉西他濱、卡鉑、順鉑）聯(lián)合使用時(shí)的缺陷細(xì)胞 。但是，在與這些藥物組合的 I 期研究中，沒有觀察到客觀反應(yīng) 。然而，Wee-1 抑制劑仍在臨床研究中 。

靶向 p53 的另一種方法是使用 MDM2 抑制劑，該抑制劑在野生型 p53 存在時(shí)具有活性。有趣的是，MDM2 過表達(dá)與 GBCA 的預(yù)后不良有關(guān)。有幾種小分子 MDM2 抑制劑，例如 MI-219 和 Nutlin-3 的類似物，它們正在開發(fā)中。

賊后，基于一項(xiàng)回顧性研究，還提出了第三種靶向突變TP53的方法，該研究表明，與野生型患者相比， TP53 突變型晚期癌癥患者在接受含有貝伐單抗的方案治療時(shí)具有更長的無進(jìn)展生存時(shí)間。 -類型TP53 。此外，TP53突變與VEGF-A mRNA 表達(dá)增加相關(guān)，這是貝伐單抗的目標(biāo) 。

5 靶向藥物臨床試驗(yàn)概述

過去 60 年來，治療晚期惡性腫瘤的模式發(fā)生了變化。歷史上，化學(xué)治療劑已被用于治療多種類型的癌癥。科學(xué)家們現(xiàn)在正試圖利用癌癥生物學(xué)、基因組學(xué)和免疫調(diào)節(jié)方面不斷增長的知識來創(chuàng)造對良性細(xì)胞危害較小、對癌細(xì)胞更致命的靶向療法。迄今為止，在晚期疾病中進(jìn)行的分子匹配方法已經(jīng)對個(gè)性化癌癥治療產(chǎn)生了重要的見解。因此，這種方法是有先例的。

GBCA 體細(xì)胞改變的鑒定概念（表3) 可以與針對同源基因組改變的靶向藥物配對，這已被證明可以在多種癌癥類型中導(dǎo)致更高的反應(yīng)率 。例如，在BRAF V600E突變的黑色素瘤患者中使用威羅非尼和曲美替尼可顯著提高生存率 。同樣，分別用厄洛替尼和克唑替尼靶向肺癌中的EGFR突變和EML4-ALK融合產(chǎn)物，已導(dǎo)致顯著改善的結(jié)果 。賊后，針對 PI3K/AKT/mTOR 通路與同源抑制劑聯(lián)合使用（但不是作為單一藥物）導(dǎo)致疾病穩(wěn)定超過 6 個(gè)月，并且在PIK3CA突變個(gè)體中部分緩解率高達(dá) 45% 。

盡管有上述針對其他疾病的研究，但 PubMed 的一篇綜述顯示，使用靶向藥物治療膽道癌的已發(fā)表臨床試驗(yàn)數(shù)量有限（表 2）。除一份報(bào)告外，對未經(jīng)選擇的人群進(jìn)行了治療。少有一項(xiàng)在選定人群中報(bào)告結(jié)果的試驗(yàn)在KRAS野生型人群中使用了抗 EGFR 抗體帕尼單抗。由于這些研究中的反應(yīng)率變化很大，因此很難評估靶向藥物的貢獻(xiàn)。此外，在幾項(xiàng)僅使用靶向藥物的試驗(yàn)中，反應(yīng)率非常低，這表明生物標(biāo)志物選擇的重要性。事實(shí)上，賊近的大型薈萃分析（約 70,000 名患者）表明，匹配的靶向治療可改善結(jié)果，但沒有匹配的靶向治療通常具有低或可忽略的有益效果 。此外，在晚期難治性 GBCA 和膽管癌患者中，主要匹配的靶向藥物或局部治療的 I 期試驗(yàn)的 PFS 與 FDA 批準(zhǔn)的藥物的一線、二線和賊后一線治療相似 。此外，用肝動脈輸注奧沙利鉑和血管生成抑制劑、HER-2 或 MEK 治療導(dǎo)致疾病穩(wěn)定超過 6 個(gè)月，在 28% 接受過大量治療的膽道惡性腫瘤患者中部分緩解。

6 正在進(jìn)行的試驗(yàn)

在過去 6 年中注冊的新膽道和相關(guān)方案的臨床試驗(yàn).gov 搜索確定了 38 個(gè)方案（搜索標(biāo)準(zhǔn)：2009 年 1 月 1 日至 2015 年 10 月 1 日期間在數(shù)據(jù)庫中注冊的試驗(yàn)；膽囊癌或膽管癌或膽道癌）。對這些方案的審查確定，其中只有六個(gè)使用針對 EGFR 和 MEK 的靶向藥物，這些藥物針對的是經(jīng)過生物標(biāo)志物選擇的人群（表 2）。據(jù)消化科腫瘤靶向用藥優(yōu)化提高協(xié)作團(tuán)隊(duì)所知，尚無對 GBCA 患者使用 PD-1 或?? PD-L1 阻斷劑進(jìn)行免疫治療的試驗(yàn)。

7 結(jié)論

膽囊癌是罕見的侵襲性腫瘤，使用生物標(biāo)志物引導(dǎo)的靶向治療的臨床試驗(yàn)很少。標(biāo)準(zhǔn)化療治療的中位生存期約為 1 年。基因組匹配或免疫治療選擇目前尚未獲得 FDA 批準(zhǔn)。使治療決策復(fù)雜化，GBCA 與其他膽道惡性腫瘤，如肝內(nèi)和肝外膽管癌，但 GBCA 生物學(xué)是不同的。事實(shí)上，大多數(shù)生物學(xué)研究將這些癌癥的信號通路歸為一類，盡管它們之間存在差異（圖1）。在肺癌和黑色素瘤中，使用基于特定分子或生物學(xué)改變的匹配靶向治療，這些改變指向基因組靶向治療和/或免疫治療策略的利用，已導(dǎo)致生存率顯著提高，并作為認(rèn)知方法向周到臨床的范式轉(zhuǎn)變試驗(yàn)設(shè)計(jì)。因此，原發(fā)性和/或轉(zhuǎn)移性疾病的病理記錄對于基因組分析至關(guān)重要。在 GBCA 中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種潛在的可操作基因組改變（表3）。此外，一些基因共享共同的下游信號通路，包括 MAPK ( N = 7)、PI3K/AKT/mTOR ( N = 5)、磷脂酶 Cγ ( N = 2)、Wnt/β-catenin ( N = 2) 和染色質(zhì)重塑復(fù)合物 ( N = 2) (表 4）。其他途徑（包括 TP53/MDM2/MDMX、TGF-β、Src、JNK、JAK/STAT、PKC、FGF、細(xì)胞質(zhì) NADPH 產(chǎn)生、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和細(xì)胞周期調(diào)控）各自僅與一個(gè)基因相關(guān)。盡管有許多可用的同源靶向藥物的改變或途徑（表 4)，很少有人在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行過研究，而在臨床試驗(yàn).gov 上的搜索顯示，此類協(xié)議的持續(xù)缺乏。迫切需要開發(fā)一種生物標(biāo)志物驅(qū)動的方法，用于 GBCA 等罕見惡性腫瘤的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

表 4

將基因組改變與膽囊癌的靶向治療相匹配：值得研究的理論可操作性

a列表包括 FDA 批準(zhǔn)的藥物，但標(biāo)簽外適應(yīng)癥

Genomics of gallbladder cancer: the case for biomarker-driven clinical trial design.

Sicklick JK, Fanta PT, Shimabukuro K, Kurzrock R.

Cancer Metastasis Rev. 2016 Jun;35(2):263-75. doi: 10.1007/s10555-016-9602-8.